國(guó)產(chǎn)梯度PCR儀采用VeriFlex技術(shù),可實(shí)現(xiàn)更好的引物退火溫度控制。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計(jì)帶有三個(gè)或更多分割金屬模塊的PCR儀,每一模塊都具有獨(dú)立的加熱和冷卻元件。相比于梯度模塊,該模塊設(shè)計(jì)可帶來:
1、獨(dú)立設(shè)置3或6個(gè)不同溫度的能力,以便使得每個(gè)獨(dú)立的區(qū)域都能進(jìn)行更好的溫度控制,特別是在梯度優(yōu)化過程中。
2、獨(dú)立金屬模塊的絕熱性阻止了模塊之間的熱交換。這就可實(shí)現(xiàn)更為精準(zhǔn)的模塊溫度控制,確保模塊之間實(shí)現(xiàn)真正線性的溫度變化。
“優(yōu)于傳統(tǒng)梯度”技術(shù)的PCR儀模塊可實(shí)現(xiàn)更為精準(zhǔn)的溫度控制。VeriFlex模塊上設(shè)置為4°溫度間隔差的6塊獨(dú)立區(qū)域的溫度測(cè)量。
梯度溫度控制是幫助用戶進(jìn)行PCR優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的特性之一,以便確定PCR實(shí)驗(yàn)方案的溫度和保持時(shí)間,盡量減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)。在理論上,真正的梯度應(yīng)在均勻的金屬加熱模塊上顯示線性溫度斜率。
然而,傳統(tǒng)梯度PCR儀通常只采用單一的熱模塊并通過位于兩端的兩個(gè)加熱及冷卻元件進(jìn)行溫度的控制。該設(shè)計(jì)經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致以下限制:
1、僅能設(shè)置兩個(gè)溫度:在熱模塊的兩端設(shè)置引物退火的高、低極限溫度。因此,無法在模塊間實(shí)現(xiàn)其他區(qū)域溫度的精準(zhǔn)設(shè)置。
2、由于不同列之間的熱學(xué)相互作用,模塊上不同區(qū)域之間的溫度更可能遵循的是S形的曲線變化而非真正的線性梯度。
因此,選擇能夠精準(zhǔn)進(jìn)行梯度溫度控制的國(guó)產(chǎn)梯度PCR儀將大大節(jié)省優(yōu)化所需時(shí)間,找到合適的退火溫度和時(shí)間,并確保在梯度模式下優(yōu)化的條件在正常模式下也能獲得相同的結(jié)果。